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北京鑒聯基因科技有限公司
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支原體檢測

  細胞鑒定     |      2022-08-24 17:15:26

支原體檢測:熒光PCR+毛細管電泳(藥典推薦)。2021本平臺的支原體檢測法已更新為熒光PCR+毛細管電泳。替代原來的PCR法+恒溫法,靈敏度更高、更精確。
細胞培養液是否有支原體污染,該方法可覆蓋ATCC/DSMZ報道的細胞培養支原體污染中常見的10大類55個亞種的污染。


支原體檢測
在細胞培養過程中,支原體感染的情況常有發生。當細胞(特別是傳代細胞)被支原體污染后,細胞內的DNA、RNA及蛋白表達會發生改變,而細胞的生長率通常并未發生顯著的影響,因此細胞被支原體污染一般難以察覺。美德華生使用支原體特異性引物擴增細胞培養樣本,與含有支原體的陽性標準品和不含有支原體的陰性標準品比對,便可知道細胞樣本中是否含有支原體。除此之外,還可以根據擴增產物的片段大小判斷污染細胞的支原體的種類。

PCR法檢測的支原體

13種支原體大約占污染細胞的支原體種類的99%左右,因此PCR能達到99%;
+恒溫法則能達到99.9%。

華科鑒聯基因可以提供PCR法+恒溫法支原體檢測。暫不提供培養法支原體檢測。

《PCR法支原體檢測試劑盒》可用于檢測一切可能含支原體的樣品,比如:

(1)體外細胞培養的上清;
(2)血清;
(3)各種體液,如唾液、尿液、鼻腔分泌物等;
(4)別的液體樣品。本產品僅供研究使用。

產品簡介

    哺乳動物細胞的培養,支原體(Mycoplasma)污染是個世界性的問題。支原體污染幾乎可以改變細胞的所有參數,導致實驗結果的不準確、甚至完全錯誤(支原體污染對細胞的詳細危害,請參考本公司的網站:www.yisemed.com)。從2013年開始,《Nature》期刊已正式要求投稿的文章,如涉及細胞培養都要進行支原體檢測。相信會有越來越多的高水平期刊將做出同樣的支原體檢測要求。

    培養法是相對可靠的支原體檢測技術,但是該方法非常耗時的,需要數周,不適合作為細胞培養液中支原體污染的快速檢測。此外,通過固體培養法無法檢測污染細胞的一種最常見的支原體,即豬鼻支原體(M.Hyorhinis)。這是因為豬鼻支原體無法在支原體固體培養基上形成可見的菌落。而豬鼻支原體約占所有支原體污染的20-50%。

    有的實驗室使用熒光染色法檢測支原體,但是該方法靈敏度太低,當檢測成陽性時,細胞經常已經嚴重污染。

    本公司已經開發出了專用于體外細胞培養的《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》,與PCR法支原體檢測相比,其具有許多優點:耗時短、靈敏度高、操作簡單、不會被細胞代謝產物抑制、結果無需電泳肉眼可直接判斷等。

    盡管如此,《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》可能也有個小缺點:因為《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》需要至少同時使用4條引物才能完成擴增,其引物設計相對困難。雖然經我們測試,該試劑盒至少可認識其說明書中列舉的13種支原體,而這13種支原體大約占污染細胞的支原體種類的99%左右。但是,不排除《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》無法識別個別在體外細胞培養中出現概率極低的支原體。為此,我們特意開發了具有廣譜識別能力的《PCR法支原體檢測試劑盒》。


    經測試,本公司開發的《PCR法支原體檢測試劑盒》至少可以識別在體外細胞培養中曾經報道出現的20種支原體,根據文獻報道,這些支原體基本上占污染細胞的支原體種類的100%。具體如下:(1)M. hyorhinis、(2)M. fermentans、(3)M. arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M. bovis、(11)  M. bovoculi、(12)Acholeplasma axanthum、(13)M. buccale、 (14) M. pneumoniae、(15)M. arthritidis、(16)M. pulmonis、(17)M. gallisepticum、(18)M. gallinarum、(19)M. canis、(20)Ureaplasma urealyticum(注:M.為Mycoplasma的縮寫)。
如果客戶發現除上述20種支原體外,還有其他的支原體也會污染體外培養的細胞,或者客戶純粹就是想檢測其他的支原體,請告訴我們支原體的名稱,我們將進行序列比對,然后告訴你本試劑是否可以識別。此外,根據支原體DNA的序列,本試劑盒可以識別100多種至今已發現的支原體,具有廣譜的識別能力。

 

    此外,作為支原體檢測領域的共識,單獨使用任何一種支原體檢測方法,都無法做到100%正確,既不會漏檢(假陰性),也不會多檢(假陽性)。嚴格的支原體檢測,至少需要使用兩種(最好使用三種)不同原理的支原體檢測方法同時進行檢測,才能使檢測結果接近100%正確。

 

    如果您想得到100%正確的支原體檢測結果(比如,開展細胞治療的客戶,進行干細胞培養的客戶,生產血清、胰酶、培養液的客戶,出售各種原代培養細胞系和腫瘤細胞系的客戶等),任選本公司生產的《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》、《PCR法支原體檢測試劑盒》和《發光法支原體檢測試劑盒》中的兩種進行檢測,將會得到比較滿意的結果,檢測的正確率應該在99.9%以上。如果同時使用這三種試劑盒進行檢測,檢測的正確率應該在99.99%以上。

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